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重组磷脂酶C的改性怎么使用层析冷柜

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  层(ceng)析冷柜在重(zhong)组磷(lin)脂酶C的(de)改性应用(yong),其特(te)征在于:包(bao)括以下步骤:

      1、修饰剂SSmPEG的制备:向(xiang)烧(shao)瓶(ping)中(zhong)加入(ru)2g分子量为(wei)5000的单甲氧基聚乙二醇mPEG,再(zai)加入4mLNN二甲(jia)(jia)基甲(jia)(jia)酰胺,充分(fen)溶解;随后加入(ru)0.12g丁二酸酐,密封(feng)混匀,于100℃边(bian)搅拌边(bian)加热3h;待(dai)反应(ying)物冷(leng)(leng)却后于层析冷(leng)(leng)柜(ju)中逐(zhu)滴加入10mL乙(yi)醚(mi),将(jiang)所(suo)得沉(chen)淀过滤干(gan)(gan)燥(zao);干(gan)(gan)燥(zao)后(hou)的沉(chen)淀用(yong)二氯甲烷(wan)复溶,再用(yong)乙(yi)醚(mi)沉(chen)淀,重复四次;所(suo)得沉(chen)淀产物(wu)真空干(gan)(gan)燥(zao),在干(gan)(gan)燥(zao)器(qi)中保存备用(yong);将(jiang)上(shang)述终产物(wu)溶于4mL NN二甲基甲酰胺,加入0.46g N羟基琥珀酰(xian)亚胺(an)和0.825g二(er)环(huan)己(ji)基碳二(er)亚(ya)胺,30℃溶解(jie)过夜,将反应产物(wu)置(zhi)于层析冷柜中冷却至0℃,逐(zhu)滴加入40mL乙(yi)醚,将(jiang)所得沉淀过滤干(gan)燥(zao);干(gan)燥(zao)后的沉淀用(yong)二氯甲烷复溶,再(zai)用(yong)乙(yi)醚沉淀,重复四次;终沉淀产物即为活化的聚乙(yi)二醇,将(jiang)其(qi)干(gan)燥(zao),备用(yong);

      2、修饰酶的制(zhi)备(bei):将SSmPEG和(he)磷脂酶C030的摩尔比(bi)例溶解于体积(ji)为10mLpH7.2,浓(nong)度为(wei)25mMTrisHCl缓冲液中,在室(shi)温下震(zhen)荡(dang)反应一定时间(jian),用透析袋4℃透析(xi)过夜,所得的修饰酶液冷冻干燥后备用。欣谕层析冷(leng)柜lesdl.com可定制非标层析柜。15403523603905.jpg

 


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